高效液相色譜儀（High Performance Liquid Chromatography,HPLC）是現代分析化學中應用z廣泛、分離效率z高的儀器之一，被譽為“色譜z王”。它利用高壓泵將流動相（液體溶劑）以恒定流速輸送至裝有固定相的色譜柱中，使樣品中的各組分在固液兩相間進行反復分配。由于不同組分與固定相的相互作用力（如吸附、分配、離子交換等）存在差異，它們在色譜柱內的移動速度不同，從而實現高效分離。
HPLC的核心優勢在于其高分離效能、高靈敏度及廣泛的適用性。它不僅能分析揮發性和熱穩定性差的化合物（這是氣相色譜無法解決的），還能對極性、非極性、離子型及大分子物質進行定性定量分析。現代HPLC系統通常由輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器（如紫外-可見光檢測器UV-Vis、熒光檢測器、質譜檢測器等）及數據處理系統組成。其中，高壓輸液泵能提供高達40MPa以上的壓力，確保流動相快速通過細粒徑填料填充的色譜柱，顯著提升分離度；而高靈敏度檢測器則能檢測到納克甚至皮克級別的微量成分。
1、輸液系統
儲液器：用于儲存流動相，通常由玻璃或不銹鋼制成，配有溶劑過濾裝置以防止顆粒進入系統。
脫氣裝置：去除流動相中的溶解氣體，避免基線噪聲和泵故障。
高壓泵：將流動相以恒定或梯度流速泵入系統，是HPLC的動力核心。高壓泵需滿足流量恒定、無脈動等要求，流速范圍通常為0.001 mL/min至10 mL/min或更高，具體取決于泵類型（如單元泵、二元泵、四元泵）和分析模式。壓力范圍從常規HPLC的數百bar（如600 bar）到超高效液相色譜（UHPLC/UPLC）的超過1000 bar（如1300 bar或更高）。
2、進樣系統
手動進樣器：通常使用高壓六通進樣閥，通過旋轉閥門將樣品注入流動相流路。
自動進樣器：支持大容量樣品盤（如100個2mL樣品瓶或96/386孔板），可實現自動化操作，并常配備溫度控制和針頭清洗功能以降低交叉污染。進樣量范圍通常在0.1μL至100μL或更高（如通過選件可達1800μL）。
3、分離系統
色譜柱：分離系統的核心部件，由柱管和固定相（填料）組成。柱管材質多為不銹鋼，內徑常見為2.1 mm、3.9 mm或4.6 mm，柱長50-300 mm。填料粒徑從傳統的5μm、3μm發展到UHPLC常用的亞2μm（如1.7μm）。固定相類型多樣，z常用的是C18鍵合硅膠（ODS）反相色譜柱，也有無定型和球型之分。此外，還有鍵合C8、C4、C2、苯基等其他反相填料。
柱溫箱：用于精確控制色譜柱的溫度，溫度穩定性對保留時間的重現性至關重要。常見溫度控制范圍從低于室溫10℃至80℃或更高（如可達110℃），穩定性可達±0.15℃甚至±0.05℃。高容量柱溫箱可容納多根色譜柱，并可能配備柱切換閥以實現方法的自動切換。
4、檢測系統
紫外-可見光檢測器（VWD）：z常用的檢測器，波長范圍通常為190-600 nm或更寬，用于檢測具有紫外吸收的化合物。
二極管陣列檢測器（DAD/PDA）：可提供全波長光譜信息，用于定性分析和峰純度檢查。
熒光檢測器（FLD）：專門用于檢測熒光物質，靈敏度高。
示差折光檢測器（RID）：用于檢測折光率變化，適用于紫外區無吸收的化合物，但靈敏度較低。
蒸發光散射檢測器（ELSD）：適用于檢測揮發性低于流動相的化合物，如糖類、脂類等。
質譜檢測器（MS）：液相色譜-質譜聯用（LC-MS）技術結合了液相色譜的分離能力和質譜的高靈敏度檢測能力，是復雜樣品定性和痕量分析的選擇。
5、數據處理系統
色譜數據系統（CDS）：用于控制儀器參數、采集數據、處理色譜圖以及生成報告。軟件通常具備審計追蹤、用戶管理和數據歸檔功能，以滿足GMP/GLP等法規要求。現代CDS系統還支持遠程監控、多儀器控制和數據共享等高級功能。
